3D-модель воспаления SynRAM™ от SynVivo для визуализации роллинга, адгезии и миграции в одном анализе была разработана для изучения всего пути воспаления в динамической среде. Платформа SynVivo обеспечивает физиологически реалистичную модель (включая поток и сдвиг) и позволяет в режиме реального времени отслеживать процессы качения, адгезии и миграции. Модель воссоздает гистологический срез сокультивированной ткани и/или опухолевых клеток с просветом из эндотелиальных клеток. Она была успешно проверена в исследованиях in vivo, показав отличную корреляцию со скоростями качения, адгезией и миграционными процессами (Lamberti et al 2014, Soroush et al 2016).
Взаимодействие лейкоцитов и эндотелия на чипе
3D-модель воспаления SynRAM обеспечивает реалистичную среду тестирования, включая:
Физиологическое напряжение сдвига в микрососудистой среде;
Морфология, подобная морфологии сосудов in vivo, с полностью закрытым просветом;
Возможность совместного культивирования для взаимодействия клеток;
Количественные данные в реальном времени по роллингу, адгезии и миграции в рамках одного эксперимента.
SynRAM позволяет оценить клеточные взаимодействия, включающие перекатывание, адгезию и миграцию через несколько клеточных слоев в одном эксперименте, в режиме реального времени, и представляет данные, тесно коррелирующие с результатами in vivo.
Инновационная конструкция SynRAM преодолевает существующие ограничения, присущие проточным камерам или анализам на основе камер Transwell. Современные конструкции проточных камер чрезмерно упрощены, не учитывают масштаб и геометрию микросреды и не могут моделировать трансмиграцию. Аналогично, камеры Transwell не учитывают сдвиг жидкости и размер/топологию, наблюдаемые in vivo. Кроме того, измерения конечной точки миграции не воспроизводимы в камерах Transwell и не обеспечивают визуализацию в реальном времени.
Запатентованные SynVivo конструкции чипов варьируются от сложных микрососудистых сетей, полученных in vivo (полученных из оцифрованных изображений), до упрощенных идеализированных сетей. Сложные сети in vivo создают реалистичный клеточный состав и морфологию сосудов, возникающие в условиях переменного сдвига и потока. Упрощенные идеализированные сети предназначены для воспроизведения клеточного состава, постоянного сдвига и условий течения.
Характеристики
Примеры моделей, функционирующих в устройствах SynRAM
Визуализация прокатки, адгезии и миграции в реальном времени
Отслеживание миграции одноклеточных в реальном времени
Взаимодействие лейкоцитов с эндотелием
Сосуд на чипе с эндотелиальными клетками
Варианты конфигураций для приобретения
В зависимости от конкретных исследовательских задач вы можете выбрать одну из конфигураций микрососудистой сети IMN2 или радиальную SMN2. Схемы устройств, используемых для разработки моделей воспаления SynRAM представлены ниже. Апикальная камера (внешние каналы) предназначена для культивирования сосудистых (эндотелиальных клеток), а базолатеральная камера (центральная камера) - для культивирования тканевых клеток. Пористая архитектура обеспечивает коммуникацию между сосудистыми и тканевыми клетками.
Конфигурации чипов
Идеализированные сетевые чипы совместной культуры (радиальные IMN2)
Все основные компоненты, необходимые для проведения анализов SynRAM, можно приобрести в виде набора от SynVivo. Доступны два формата наборов.
Стартовый набор:
Рекомендуем для первой покупки
10 чипов SynRAM (на выбор: чипы радиальной IMN2 или микрососудистой сети SMN2);
Принадлежности, включая трубки (100 футов), зажимы (25 шт.), иглы с тупым наконечником (50 шт.) и 50 шприцов объемом 1 мл;
Пневматическое устройство для заправки (требуется для заправки трубок для удаления воздуха).
Примечание: не включает другие необходимые расходные материалы, такие как клетки, среды и матрицы. Необходимое лабораторное оборудование: инкубаторы, инвертированные микроскопы и шприцевые насосы.
Набор для анализа:
Выберите этот формат набора, если вы ранее приобрели устройство для пневматической заливки.
10 чипов SynRAM (на выбор: чипы радиальной IMN2 или микрососудистой сети SMN2);
Принадлежности, включая трубки (100 футов), зажимы (25 шт.), 50 игл с тупым наконечником и 50 шприцов объемом 1 мл.
Примечание: Не включает другие необходимые расходные материалы, такие как клетки, среды и матрицы. Необходимое лабораторное оборудование: инкубаторы, инвертированные микроскопы и шприцевые насосы.
Применения
Применения моделей SynRAM от SynVivo
Приложения и конечные устройства с использованием модели SynRAM:
Доступные модели:
Монокультура с использованием первичных эндотелиальных клеток/клеточной линии
Совместная культура со стромальными/тканевыми клетками
Анализы:
Иммунные клетки (первичные, клеточные линии) роллинг, адгезия и миграция через эндотелий
Проницаемость сосудов, вызванная воспалением
Индуцированное лекарствами повреждение сосудов
Анализ биомаркеров, вызванных воспалением
Терапевтический скрининг
Использования образцов SynRAM: количественная оценка взаимодействия иммунных клеток с эндотелием. Проницаемость сосудов с использованием флуоресцентно-меченых молекул, ROS, скрининг биомаркеров с помощью иммуноанализа, геномного, протеомного или метаболомного анализа.
Изучения роли классических ингибиторов отдельных этапов каскада адгезии лейкоцитов
Микрофлюидные чипы SynRAM, состоящие из реалистичных микрососудистых сетей, были использованы для изучения роли классических ингибиторов отдельных этапов каскада адгезии лейкоцитов. Экспериментальные результаты очень хорошо совпали с данными in vivo, что подчеркивает уникальные возможности платформы для анализа этих динамических событий в реальном времени в морфологически реалистичной среде (Lamberti et al 2014).
Скатывание, адгезия и миграция нейтрофилов в БМФА; миграция нейтрофилов (помеченных флуоресцентным красителем) в тканевый отсек БМФА после 120 мин непрерывного потока. (1 и 2) Сплошные стрелки в верхних правых панелях показывают катящийся нейтрофил, который (3) становится прилипшим; пунктирные стрелки в верхних правых панелях показывают прочно прилипшие нейтрофилы. Нейтрофил, мигрирующий из сосудистого русла через барьер в тканевый отсек с течением времени (внизу справа).
Скатывание нейтрофилов с помощью микрофлюидных чипов SynRAM аналогично скатыванию лейкоцитов in vivo; графики в квадрате и усов суммируют сравнение скорости скатывания лейкоцитов, измеренной in vivo и в чипах SynRAM, и не показывают существенной разницы (p=0,758; Mann-Whitney Rank Sum Test). Знак "+", отмеченный в квадрате, указывает на среднее значение.
Адгезия нейтрофилов в микрофлюидных чипах SynRAM аналогична адгезии лейкоцитов in vivo; распределение количества адгезированных лейкоцитов и нейтрофилов как функция расстояния от ближайшей бифуркации in vivo в модели кремастерной мышцы мыши и in vitro в микрофлюидных чипах, соответственно. Обе гистограммы перекошены влево, что указывает на то, что лейкоциты и нейтрофилы преимущественно прилипают вблизи бифуркаций с пиком, возникающим на расстоянии одного диаметра сосуда или канала от ближайшей бифуркации.
Исследование эффекта блокирования специфических этапов пути воспаления с помощью моноклональных антител
Блокирование антителами определенных этапов каскада адгезии/миграции снижает уровень других этапов каскада; моноклональные антитела против Е-селектина (aE-селектин), ICAM-1 (aICAM-1) и PI3K (вортманнин) значительно снижают количество катящихся, прилипающих и мигрирующих нейтрофилов в микрофлюидных устройствах SynRAM.
Блокирование антителами определенных этапов каскада адгезии/миграции снижает уровень других этапов каскада; моноклональные антитела против Е-селектина (aE-селектин), ICAM-1 (aICAM-1) и PI3K (вортманнин) значительно снижали количество катящихся, прилипающих и мигрирующих нейтрофилов в бМФА. Цифры представляют собой процент активности после обработки клеток соответствующими блокаторами по сравнению с соответствующими контрольными значениями (среднее ± SEM; N = 3).
Выяснение механизма участия белковой киназы С дельта (PKCδ) в реакции воспаления, связанной с сепсисом
Модель была использована для определения механизма, лежащего в основе взаимодействия нейтрофилов и эндотелия, зависящего от протеинкиназы С дельта (PKC-δ). Было установлено, что эти взаимодействия играют важную роль в воспалительной реакции. Они обнаружили, что PKCδ является критическим регулятором адгезии и миграции нейтрофилов через эндотелиальные клетки человека во время воспаления. Это было подтверждено путем тестирования в условиях физиологического потока жидкости всего процесса воспаления, включающего роллинг, адгезию и миграцию в режиме реального времени.
Ингибитор PKCδ значительно снижает миграцию нейтрофилов из сосудистых каналов, через воспаленный эндотелий (обработанный TNF-α в течение 4 или 24 часов), в тканевой компартмент в ответ на fMLP-опосредованный сигнал по сравнению с необработанным контролем.
Иммуногистохимическое определение миелопероксидазы (MPO) в репрезентативных срезах легочной ткани через 24 часа после операции. Немногочисленные MPO-положительные клетки при операции Sham. Сепсис вызывает инфильтрацию многочисленных MPO-положительных клеток по всей паренхиме легкого. Ингибитор PKCδ-TAT значительно уменьшает количество MPO-положительных клеток в легких, вызванное сепсисом, что указывает на снижение миграции нейтрофилов.
Хемотаксис и миграция
Клетки инкубируются в сосудистом канале, а хемоаттрактант вводится в тканевую камеру или второй сосудистый канал (при использовании идеализированной сети). Миграция иммунных клеток через пористую область в тканевую камеру наблюдается в режиме реального времени. Анализ можно проводить в статических или проточных условиях.
Анализ опосредованного сворачивания, адгезии и миграции сосудов (эндотелиальных клеток)
Эндотелиальные клетки, культивируемые в сосудистом канале, активируются биологическими или химическими агентами, чтобы вызвать воспалительную реакцию, после чего в режиме реального времени отслеживается перемещение, адгезия и миграция иммунных клеток через эндотелий в тканевую камеру.
Анализ опосредованного сворачивания, адгезии и миграции сосудов и тканевой со-культуры
Эндотелиальные клетки культивируются в сосудистом канале, а в тканевой камере находятся гладкомышечные клетки, эпителиальные клетки, фибробласты или органоспецифические клетки (например, астроциты, гепатоциты). В ответ на клеточные сигналы и активацию воспаления можно наблюдать и количественно оценивать в реальном времени роллинг, адгезию и миграцию через эндотелий.
Роллинг, адгезия и миграция лейкоцитов через воспаленный сосудисто-тканевой интерфейс.
Сосуды на чипе могут быть функционализированы с помощью любого из устройств SynVivo для в целях транспортировки лекарств, повреждения сосудов, взаимодействия эндотелия и иммунных клеток или для других целей.
Эндотелиальные клетки HUVEC в условиях потока
Первичные эндотелиальные клетки головного мозга крыс в нижнем течении
Эндотелиальные клетки головного мозга hCMEC/D3 под потоком
Товар бывает в наличии на нашем складе в РФ крайне редко. Из-за высокой стоимости и специфических характеристик высокотехнологического оборудования в большинстве случаев оно отсутствует и на складе самого производителя, так как производится под конкретный заказ.
Недорогие расходные материалы и дополнительные комплектующие, пользующиеся популярностью, производятся в значительном количестве и могут быть отправлены нам нашими поставщиками в течение пары дней после получения оплаты по инвойсу.
1. Наличие товара на складе производителя и срок его производства;
Если товара нет на складе производителя, срок производства высокотехнологичного оборудования, как правило, составляет от трех до шести недель. Производство сложных комплексных систем может занимать больше времени.
2. Время на доставку груза в РФ;
Срок доставки груза в РФ зависит от его веса и габаритов. Если груз небольшой, то он летит самолетом, что занимает один-три дня до таможенного склада. Если вес груза измеряется сотнями килограммов, то он плывет кораблем в пределах месяца.
3. Срок прохождения таможенного контроля.
Данный этап занимает до 10 дней. В случае непредвиденных обстоятельств процесс таможенного оформления может затянутся на месяц и больше.
Срок поставки комплектующих Thorlabs занимает от 4 недель.