Цель проекта
Создать в лаборатории комплексную платформу для высококонтрастной флуоресцентной визуализации, сверхразрешающей STED-микроскопии и анализа времени жизни флуоресценции FLIM. Сочетание этих методов позволяет исследовать не только морфологические изменения клеточных структур с нанометровым пространственным разрешением, но и получать дополнительную информацию о локальном микроокружении флуорофоров, межмолекулярных взаимодействиях и функциональном состоянии клеток.
Решение
Специалисты АЗИМУТ ФОТОНИКС установили и ввели в эксплуатацию систему сверхвысокого разрешения Abberior STEDYCON на базе инвертированного флуоресцентного микроскопа Zeiss Axio Observer 7.
В рамках проекта были выполнены монтаж оборудования, пусконаладочные работы и проверка характеристик комплекса. Также специалисты АЗИМУТ ФОТОНИКС провели обучение сотрудников лаборатории работе с методами сверхразрешающей микроскопии STED и анализа времени жизни флуоресценции FLIM.
Преимущества оборудования для исследований лаборатории
Система Abberior STEDYCON расширяет возможности Лаборатории радиационной биологии при изучении молекулярных механизмов клеточного ответа на ионизирующее излучение.
Сверхразрешающая микроскопия STED позволяет преодолеть дифракционный предел традиционной оптической микроскопии и исследовать ультраструктуру клеток, отдельные белковые комплексы, элементы цитоскелета и мембранные структуры. Для задач радиобиологии технология может применяться для анализа организации комплексов репарации ДНК, распределения маркеров двойных разрывов ДНК, пространственного расположения белков клеточного ответа и изменений ядерной архитектуры после облучения.
FLIM — микроскопия времени жизни флуоресценции дополняет структурную визуализацию функциональной информацией. Метод позволяет исследовать локальное микроокружение флуорофоров, межмолекулярные взаимодействия и биохимическое состояние клетки. В радиобиологических исследованиях FLIM может применяться для анализа изменений клеточного метаболизма по эндогенной флуоресценции NADH и FAD, изучения оксидативного стресса, состояния митохондрий и изменений энергетического обмена после облучения.
FRET-FLIM дает возможность количественно исследовать взаимодействия между белками непосредственно в живых клетках, в том числе процессы формирования белковых комплексов репарации ДНК и изменения межбелковых взаимодействий под воздействием ионизирующего излучения.
Главное преимущество установленного комплекса — сочетание STED и FLIM в единой системе. Исследователи могут получать данные о пространственной организации клеточных структур с высоким разрешением и одновременно анализировать функциональные и биохимические изменения, происходящие в клетках.
