Арт. Alpha1
Тестирование системы Alpha3 проводили на эмбрионах мыши и образцах тканей взрослых мышей с различными флуоресцентными метками. Одна из основных задач состояла в получении трёхмерных изображений тканей значительной толщины для последующего анализа пространственного распределения клеток и молекулярных маркеров.
С помощью Alpha3 были получены детализированные трёхмерные изображения образцов, просветлённых по протоколу ScaleS, на глубине до 400–500 мкм по оси Z. Полученные данные позволяют визуализировать расположение клеток, сопоставлять сигналы разных флуоресцентных каналов и исследовать распределение молекулярных маркеров в объёме ткани.
Полученные результаты
Рис. 1. Объёмное изображение образца семенника с глубиной исследования 400–500 мкм по оси Z. Представлены каналы DAPI и RFP.
Рис. 2. Объёмное изображение сосудов фрагмента эмбриона мыши. Сосуды окрашены по маркеру VE-Cadherin, флуоресцентная метка Alexa647.
Возможности применения в биологических исследованиях
Флуоресцентная микроскопия плоскостного освещения позволяет исследовать биологические образцы в трёх измерениях, сохраняя информацию о взаимном расположении клеток и тканевых структур. В отличие от анализа отдельных тонких гистологических срезов, объёмные данные позволяют рассматривать структуры в их пространственном контексте и оценивать распределение флуоресцентных сигналов в исследуемом объёме.
В исследованиях стволовых клеток такой подход может быть полезен для изучения:
- формирования тканей и органов в ходе эмбрионального развития
- возрастных изменений ниш стволовых клеток;
- миграции и дифференцировки клеток;
- распределения флуоресцентно меченных клеток в объёме ткани;
- тканевой архитектуры;
- межклеточных взаимодействий в сложных биологических системах.
- нарушений тканевой организации при патологических процессах.
Благодаря модульной конструкции и возможности адаптации к различным типам образцов система Alpha3 также может применяться для исследования органоидов и других объёмных биологических образцов, требующих анализа пространственной организации.
Итоги тестирования
Тестирование подтвердило применимость системы Alpha3 для анализа подготовленных биологических образцов.
В ходе тестирования были получены детализированные трёхмерные многоканальные изображения фрагмента эмбриона мыши и образцов тканей взрослых мышей на глубине до 400–500 мкм по оси Z. Результаты продемонстрировали возможность визуализации клеточных структур и оценки пространственного распределения флуоресцентных маркеров.
Отзыв подготовил: Андрей Анатольевич Кузьмин, Старший научный сотрудник Лаборатории молекулярной биологии стволовых клеток, Институт цитологии РАН
