Комплект Atto425 для маркировки методом Ник-трансляции от Jena Bioscience содержит все необходимые реагенты (кроме матрицы и материалов для очистки зонда), обеспечивая высокоэффективную, простую в выполнении и быструю технологию мечения. Набор рекомендуется для прямого ферментативного мечения ДНК. Смесь для мечения NT Atto425 содержит специально оптимизированный Atto425-dUTP для включения в ДНК путем ник-трансляции с использованием ДНК-полимеразы I.
Превосходная стабильность и квантовый выход флуорофора в сочетании с высокой скоростью включения комплекса краситель-dUTP делают его идеальным выбором для широкий спектр применения флуоресценции. Маркировка методом ник-трансляции основана на обратной активности полимеразы I и ДНКазы I. ДНКаза I способна вводить случайно распределенные ники в двухцепочечную ДНК при низких концентрациях фермента. Экзонуклеазная активность 5'→3' полимеразы I удаляет нуклеотиды с 3'-стороны разрыва при синтезе частично новой комплементарной цепи с использованием 3'-ОН-концов в качестве праймера. В присутствии меченой красителем dUTP полимераза I включает меченую dUTP вместо dTTP. Хорошо сбалансированная полимеразная/нуклеазная активность смеси ферментов обеспечивает образование высоко меченых двухцепочечных фрагментов ДНК. Полученная ДНК подходит для применения в FISH, профилировании экспрессии генов на микрочипах и других анализах гибридизации нуклеиновых кислот. Защищайте dUTP с флуоресцентной маркировкой от света и проводите экспериментальные процедуры в условиях низкой освещенности.