Биотин-14-dCTP ферментативно включается в ДНК/кДНК в качестве заменителя природного аналога dCTP. Полученные зонды ДНК/кДНК, меченные биотином, впоследствии обнаруживают с использованием стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP), щелочной фосфатазой (AP), флуоресцентным красителем или агарозой/магнитными шариками. Оптимальные свойства субстрата для Ник-трансляции обеспечиваются 14-атомным линкером, присоединенным к положению N4 цитозина. Для экспериментов по включению ПЦР, например, с полимеразой Taq рекомендуется биотин-11-dCTP (#NU-809-BIOX) или биотин-16-dCTP (#NU-809-BIO16), у которых фрагмент биотина присоединен к положению C5 цитидина через 11-атомный или 16-атомный атомный линкер соответственно. Рекомендуемое соотношение биотин-14-dCTP/dCTP для Ник трансляции: 50% биотин-14-dCTP/50% dCTP.
Обратите внимание: оптимальная конечная концентрация биотин-14-dCTP может сильно зависеть от применения и условий анализа. Для оптимального выхода продукта и высоких показателей включения рекомендуется индивидуальная оптимизация соотношения биотин-14-dCTP/dCTP.
Применения:
Включение в ДНК/кДНК с помощью:
- Ник-трансляция с ДНКазой I / ДНК-полимеразой I;
- Элонгация праймера 3'-5'экзо- (фрагмент Кленова).