Биотин-14-дАТФ ферментативно включается в ДНК/кДНК в качестве заменителя природного аналога дАТФ. Полученные зонды ДНК/кДНК, меченные биотином, впоследствии обнаруживают с использованием стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP), щелочной фосфатазой (AP), флуоресцентным красителем или агарозой/магнитными шариками. Оптимальные свойства субстрата для Ник-трансляции обеспечиваются 14-атомным линкером, присоединенным к положению N6 аденина. Для экспериментов по включению ПЦР, например. с полимеразой Taq рекомендуется биотин-11-dATP (#NU-1175-BIOX), биотиновая часть которого присоединена к положению N7-Deaza аденина через 11-атомный линкер. Рекомендуемое соотношение биотин-14-дАТФ/дАТФ для Ник-трансляции: 50% биотин-14-дАТФ/50% дАТФ.
Обратите внимание: оптимальная конечная концентрация биотин-14-дАТФ может сильно зависеть от применения и условий анализа. Для оптимального выхода продукта и высоких показателей включения рекомендуется индивидуальная оптимизация соотношения биотин-14-дАТФ/дАТФ.
Применения:
Включение в ДНК/кДНК с помощью:
- Ник-трансляция с ДНКазой I / ДНК-полимеразой I;
- Элонгация праймера 3'-5'экзо- (фрагмент Кленова).