Биотин-16-dUTP ферментативно включается в ДНК/кДНК в качестве заменителя природного аналога dTTP. Полученные зонды ДНК/кДНК, меченные биотином, впоследствии обнаруживают с использованием стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP), щелочной фосфатазой (AP), флуоресцентным красителем или агарозой/магнитными шариками. Оптимальные свойства субстрата и, следовательно, эффективность мечения, а также эффективное обнаружение фрагмента биотина обеспечиваются 16-атомным линкером, присоединенным к положению С5 уридина.
Рекомендуемое соотношение биотин-16-dUTP/dTTP для ПЦР и Ник-трансляции: 50% биотин-16-dUTP/50% dTTP.
Обратите внимание: оптимальная конечная концентрация биотин-16-dUTP может сильно зависеть от применения и условий анализа. Для оптимального выхода продукта и высоких показателей включения рекомендуется индивидуальная оптимизация соотношения биотин-16-dUTP/dTTP.
Применения:
Включение в ДНК/кДНК с помощью:
- ПЦР с Taq-полимеразой;
- Ник-трансляция с ДНКазой I / ДНК-полимеразой I;
- Элонгация праймера 3'-5'экзо- (фрагмент Кленова);
- 3'-концевое мечение: встраивание Терминальной деоксинуклеотидил Трансферазой (TdT);
- RT: обратная транскрипция с обратной транскриптазой вируса мышиной лейкемии Молони (MMLV RT).
Включение в РНК с помощью:
- 3'-концевое мечение: встраивание Терминальной деоксинуклеотидил Трансферазой (TdT).