Динамическое культивирование клеток
Микрофлюидное культивирование клеток — это микромасштабное культивирование клеток в потоке, создающее физико-механическую среду, более схожую с той, что наблюдается в клетках и тканях организма, по сравнению со статическими условиями культивирования. Клетки естественным образом чувствуют и реагируют на поток и сдвиговые силы, возникающие при кровообращении, интерстициальном потоке и лимфатическом дренаже. Микрофлюидная перфузия воспроизводит физиологический процесс переноса жидкости, что важно для обмена питательными веществами, удаления отходов и приложения напряжения сдвига. Подробнее о динамическом культивировании клеток Вы можете узнать из вебинара от эксперта Elveflow Лизы Муйжниекс. |
Вебинар Elveflow: Культивирование клеток в динамических условиях
Преимущества динамического культивирования
В этом руководстве описывается посев клеток для динамического культивирования. Произведите посев с помощью автоматического контроллера микрожидкостного потока OB1 и оставьте клетки в неподвижном состоянии в перфузионной камере. Визуально контролируйте плотность посева и получайте надежное прикрепление. Вам больше не придется беспокоится о появлении пузырьков между посевом и перфузией!
Некоторые основные области применения динамического культивирования клеток включают:
- Визуализация живых клеток (например, визуализация кальция, FISH);
- Скрининг лекарственных препаратов;
- Работа с напряжением сдвига;
- Анализ адгезии клеток: иммунный ответ, раковая инвазия и метастазирование;
- Модели физиологии и заболеваний: Органы на чипе, формирование и окклюзия кровеносных сосудов (атеросклероз), гомеостаз костной ткани и заболевания (остеопороз) и т.д.
Компоненты систем для автоматизированного посева клеток
Комплектующие набора Elveflow
Система распределения жидкости | ||
Схема установки для автоматизированного посева клеток
Оборудование
|
Реактивы
|
Протокол для автоматизированного посева клеток
- Соберите систему: подключите все модули, откалибруйте прибор, подготовьте и подключите все растворы.
- Продувка: отсоедините трубку от входа в ловушку пузырьков. Очистите все линии резервуара от воздуха. Снова подсоедините трубки.
- Подача среды: переключите вход MUX-Distributor на резервуар со средой. Запустите поток, пока перфузионная камера не заполнится средой.
- Подача клеток: переключите вход MUX-Distributor на клетки и подавайте поток, пока перфузионная камера не заполнится клетками.
- Остановите поток: переключите вход MUX-Distributor в тупик, чтобы остановить поток.
- Инкубируйте: Дайте клеткам время прилипнуть к поверхности чипа, пока не течет жидкость. Это может занять до 24 часов в зависимости от типа клеток.
Важно: точно подсчитайте клетки и сразу же используйте хорошо перемешанную суспензию.
Совет: во время посева полезно наблюдать за каналом под микроскопом.
Результаты
Перфузионная камера для автоматизированного посева клеток на столике микроскопа. Чип можно закрепить в чашке Петри для более удобного обращения.
Клетки MCF7 в чипе, оседание (t=2ч). |
Клетки MCF7 в чипе, начало адгезии (t=4ч). |
Видео посева: Клетки поступают в перфузионную камеру, заполненную средой, со скоростью потока 40 мкл/мин. Поток был остановлен путем переключения клапана MUX- Distributor в тупиковый блок при t=18 с, а затем остановкой OB1. Обратите внимание на мгновенную остановку клеток.