Исследования формирования трубок
|
Для анализа формирования трубки эндотелиальные клетки высевают поверх 10 мкл гелевого слоя (базальная мембраноподобная поверхность), где они образуют капиллярно-подобные структуры. Обычно применяется Matrigel®. Способность клеток образовывать трубку может быть использована для анализа про- или антиангиогенного потенциала различных лекарств.
|
Фазово-контрастное изображение, показывающее одну лунку слайд-камеры для ангиогенеза с HUVEC клетками на геле Matrigel®, после 12 часов инкубации в течение анализа формирования трубки.
|
Фазовый контраст (вверху) и флуоресцентная микроскопия (внизу) одной нити, состоящей из клеток HUVEC, во время анализа формирования трубки в слайд-камере для ангиогенеза. Цитоскелет F-актина окрашен в зеленый цвет, а ядра клеток окрашены в синий цвет.
|
Исследование процессов прорастания
Потенциал прорастания кластера клеток может быть легко проанализирован при использовании 96-луночного планшета для ангиогенеза. Для проведения анализа прорастания сфероиды или кусочки ткани (например, из аорты) помещают на или непосредственно в гелевую матрицу перед визуализацией.
3D культуры клеток
Во многих случаях трехмерная среда более похожа на ситуацию in vivo, чем двумерная клеточная культура. Планшет 96-луночный для ангиогенеза – это простое и экономичное решение для культивирования и микроскопии клеток, включенных в гелевые матрицы. Слой геля напрямую соединен с резервуаром для среды наверху, что обеспечивает быстрый и легкий обмен среды путем диффузии. Помимо культур с единственным типом клеток, в эксперименте по совместному культивированию можно исследовать инвазионное поведение различных типов клеток (например, раковых клеток и фибробластов). В качестве альтернативы, многослойная культура может быть создана с использованием одинаковых или разных трехмерных гелевых матриц (например, Matrigel® или коллагена). Кроме того, неприлипающие клетки, такие как клетки крови или бактерии, могут быть иммобилизованы для улучшения доступа микроскопии.
|
|
Иммунофлуоресцентное окрашивание
Для анализа результатов образования трубок или эксперимента с трехмерной культурой иммунофлуоресцентное окрашивание может быть выполнено в 96-луночном планшете для ангиогенеза. Клетки можно фиксировать и окрашивать непосредственно на геле или в нем, а затем визуализировать с помощью микроскопии с высоким разрешением.
Фокусирование клеток
При использовании менее 10 мкл геля для заполнения внутренней лунки 96-луночного планшета для ангиогенеза небольшое количество клеток можно культивировать и сфокусировать на мягкой гелевой поверхности.
Камера малого объема для микроскопии
Планшет 96-луночный для ангиогенеза также можно использовать при микроскопии в качестве камеры малого объема без применения геля, что применимо в экспериментах, где требуется несколько лунок малого объема.