Типы поверхностей дна из полимера
|
|
|
|
|
Отличная адгезия клеток |
Слабая адгезия, возможно нанесение покрытия |
Отсутствие адгезии |
|
Со структурированным покрытием |
|
|
|
Поверхности с разной геометрией областей адгезии |
Эластичная прослойка на твердой поверхности |
Разные типы покрытий, например, Collagen IV или Poly-L-Lysine |
Сравнение типов поверхностей ibiTreat, без покрытия и Bioinert
|
ibiTreat |
Без покрытия |
Биоинертная |
|
|
|
|
|
Превосходная клеточная адгезия
Гидрофильная ibiTreat поверхность обеспечивает превосходное прикрепление клеток даже без белкового покрытия. Однако, белковые покрытия ECM могут быть нанесены на ibiTreat поверхность безо всяких ограничений. Поверхность ibiTreat идеальна для культивирования адгезивных клеток, которые не требуют специфичного покрытия. |
Слабая клеточная адгезия
Гидрофобная поверхность без покрытия обеспечивает слабую адгезию без предварительно нанесенного покрытия ECM. Белковые покрытия ECM могут быть нанесены на такую поверхность безо всяких ограничений. Необработанная поверхность идеальна для культивирования адгезивных клеток, которые требуют специального покрытия. |
Клеточная адгезия отсутствует
Гидрофильная биоинертная поверхность препятствует любому присоединению белка, таким образом замедляя последующее присоединение клеток. В отличие от ibiTreat и поверхности без покрытия на биоинертную поверхность покрытие нанести невозможно. Биоинертная поверхность идеально подходит для культивирования суспензионных клеток и агрегатов клеток. |
Поверхность ibiTreat
ibiTreat - наиболее рекомендуемая модификация поверхности, поскольку большинство адгезивных клеток хорошо растут на ней без необходимости дополнительного покрытия. ibiTreat — это гидрофильная, обработанная для тканевых культур поверхность полимерного дна посуды ibidi. Эта физическая модификация поверхности, сравнимая с обработкой в культуре тканей стандартных сосудов для клеточных культур, делает поверхность гидрофильной и адгезивной практически для всех типов клеток. Поверхность ibiTreat фигурирует в более чем 20 000 рецензируемых публикациях (например: Sergey S. Ovcherenk et al.). Адгезия клеток к слайд-камерам µ-Slides с поверхностью ibiTreat достаточно сильна, чтобы проводить эксперименты с потоком, имитирующие физиологическое напряжение сдвига в потоке крови.
Первичные кератиноциты человека на полимерном покровном стекле ibiTreat ibidi
Гидрофобная поверхность без покрытия
Поверхность без покрытия не позволяет роста клеток без применения дополнительного покрытия, поэтому она не подходит для обычного культивирования адгезивных клеток. Благодаря своей гидрофобности она облегчает покрытие некоторыми белками (например, антителами) или может быть использована для неадгезивных суспензионных клеток (Протокол покрытия от ibidi). Однако для клеток в суспензии рекомендуется использовать поверхность Bioinert, которая полностью подавляет взаимодействие клеток с поверхностью, даже в долгосрочных экспериментах. Поверхность без покрытия - это гидрофобная версия полимерного дна посуды ibidi с отличными оптическими свойствами.
Клетки на поверхности полимерного дна ibidi без покрытия
Биоинертная поверхность (Bioinert)
|
|
Отсутствие прикрепления клеток Поверхность Bioinert представляет собой тонкий слой полиолового гидрогеля, который ковалентно связан с полимерным дном ibidi Polymer #1.5. В отличие от стандартных покрытий с ультранизким прикреплением (ULA), Bioinert совершенно не адгезивный и не допускает связывания ни одной биомолекулы даже в долгосрочных экспериментах. Поэтому технология Bioinert обеспечивает стабильную пассивацию в анализах на основе клеток в течение нескольких дней или даже недель. Отсутствие взаимодействий между клеткой и субстратом Bioinert создает среду, в которой межклеточное взаимодействие сильнее, чем взаимодействие «клетка-субстрат». Фактически же можно сказать, что взаимосвязи «клетка-субстрат» полностью блокируются. Стабильность поверхности Bioinert позволяет проводить длительные эксперименты в одной и той же посуде в течение нескольких дней и даже недель без адгезии каких-либо белков. Даже если клеткам требуется среда с высокой концентрацией эмбриональной телячьей сыворотки, Bioinert предотвращает прилипание клеток или белков к поверхности. Не требует предварительной подготовки Поверхность Bioinert готова к использованию. Нет необходимости в предварительной гидратации. Поверхность набухает сама по себе после смачивания буфером или клеточной средой. |
Отсутствие автофлуоресценции
Плоский, тонкий материал дна и превосходное оптическое качество полимерного дна ibidi позволяют проводить микроскопию высокого и сверхвысокого разрешения без потенциально разрушительной автофлюоресценции.
Пример применения: Сфероидная культура и 3D-модель с использованием поверхности Bioinert
Сфероиды были созданы из экспрессирующей клеточной линии LifeAct HT-1080 с помощью техники наложения жидкости на агарозу и перенесены на поверхность Bioinert для микроскопии. Изображение сфероида HT-1080 LifeAct, полученное с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии. Изображение представляет собой модель, созданную на основе серии конфокальных срезов. Цветовая шкала указывает на расстояние от поверхности покровного стекла. Теплые цвета = близко к поверхности, холодные цвета = далеко от поверхности. Микроскоп: Zeiss LSM 710, объектив Plan Apochromat 10x/0.45.
Поверхность со структурированным покрытием: адгезия клеток в определенных областях
Технология ibidi µ-Patterning обеспечивает пространственно определенную адгезию клеток для различных 2D и 3D клеточных культур. Миниатюрные адгезивные узоры (например, линии, квадраты или точки) печатаются на неадгезивной поверхности Bioinert полимерного дна посуды ibidi, что позволяет точно контролировать места адгезии клеток. Нанесенные узоры (микропаттерны) устойчивы к высыханию, стерильны и готовы к использованию. Микропаттерны, поверхность Bioinert и полимерное дно посуды ibidi оптимизированы для получения изображений высокого разрешения и микроскопии.
|
|
Формирование сфероида клеток NIH-3T3. Изображение получено через 14 дней после посева отдельных клеток. Фазово-контрастная микроскопия, объектив с увеличением 4x. |
Упруго поддерживаемая поверхность (ESS)
|
Упруго поддерживаемая поверхность (ESS) позволяет культивировать адгезивные клетки на упругой поверхности, имитируя естественную клеточную среду. В живой ткани условия роста клеток отличаются от тех, которые обычно встречаются в клеточных культурах in vitro. Параметром, влияющим на пролиферацию, дифференциацию и общую клеточную функцию, является жесткость или упругость поверхности. Упругость (модуль Юнга) большинства полимеров для клеточных культур составляет около 1 гигапаскаля (ГПа). Модуль Юнга стекла составляет приблизительно 70 ГПа. В отличие от пластика и стекла, модуль Юнга клеток млекопитающих (например, мышечных клеток) составляет менее 100 кПа. Таким образом, естественная клеточная среда по меньшей мере в 100 000 раз более эластична, чем стандартно применяемые поверхности клеточных культур. Эластичность пвоерхности ibidi ESS сопоставима с эластичностью клеток и тканей. Чашки Петри µ-Dish с покрытием ESS охватывают весь диапазон упругости, встречающийся в живых тканях, от мягких тканей (например, мозг или железы) до твердых тканей (например, хрящ или кость). Поскольку поверхность ESS без покрытия является гидрофобной и не допускает прямого роста клеток, рекомендуется использовать покрытия из внеклеточного матрикса, такие как коллаген или фибронектин. |
|
Покрытия: Collagen I, Collagen IV and Poly-L-Lysine
Для некоторых слайд-камер µ-Slides ibidi предлагает поверхности с предварительным покрытием из коллагена I, коллагена IV и поли-L-лизина на полимерном дне посуды ibidi. Мы также предлагаем высококачественный коллаген типа I из крысиного хвоста для приготовления 3D гелей и поверхностных покрытий. В протоколе покрытия от ibidi вы найдете подробную информацию о том, как самостоятельно нанести покрытие на дно слайд-камер µ-Slides, используя коллаген I, коллаген IV, фибронектин, поли-L-лизин или поли-D-лизин.
Покрытие из коллагена I
Коллаген I является наиболее распространенным коллагеном в организме человека. Чтобы способствовать лучшему прилипанию клеток, поверхности культуральных сосудов, таких как полимерное дно посуды ibidi, могут быть покрыты коллагеном I. Кроме того, для культивирования клеток часто используются 3D-гели с коллагеном I, чтобы стимулировать создание 3D-среды, подобной in vivo. ibidi предлагает готовые к использованию слайд-камеры µ-Slides, покрытые коллагеном I.
Покрытие из коллагена IV
Коллаген IV типа является одним из основных компонентов базальной мембраны, представляющей собой тонкий слой внеклеточного матрикса. В культуре клеток коллаген IV используется в качестве подложки, способствующей прилипанию и пролиферации клеток. Покрытия из коллагена IV были протестированы на различных стандартных клеточных линиях, таких как эпителиальные, эндотелиальные, нервные и мышечные клетки. ibidi использует коллаген IV мыши (Corning, № 356233) для покрытия.
Покрытие из поли-L-лизина
Поли-L-лизин (PLL) — это полимер незаменимой аминокислоты L-лизина. Этот полимер является одним из наиболее часто используемых адгезионных субстратов для клеточных культур. Он подходит для большого разнообразия типов клеток, особенно для культур нейронов. При использовании PLL адгезия опосредуется интегринонезависимым механизмом. ibidi использует для покрытия коммерчески доступный раствор PLL (Sigma-Aldrich, № P4832).
