Арт. Celloger Pro
Апоптоз
Апоптоз - это процесс запрограммированной гибели клеток, при котором происходят такие процессы, как разрушение мембраны, уменьшение размеров клетки и фрагментация ядер. В этом процессе активируется фермент каспаза, который опосредует эту реакцию в клетке. Активированная каспаза-3/7, одна из семейства каспаз, специфически расщепляет определенный пептид, известный как DEVD, и флуорофор, конъюгированный с DEVD, который полезен для количественной оценки активности каспазы и апоптоза (рис. 1).
Рис. 1 Иллюстрация механизма действия зеленого реагента для обнаружения каспазы-3/7
Было обнаружено, что флуоресцентные материалы высвобождаются и могут регистрироваться после расщепления DEVD, вызванного обработкой стауроспорином (1 мкМ), который, как известно, активирует каспазу и вызывает апоптоз. Количество флуоресцирующих веществ увеличивалось с течением времени (рис. 2).
Рис. 2 Использование регистрации флуоресценции активированной каспазы для количественной оценки апоптоза клеток Hela, вызванного стауроспорином. Масштабная линейка, 200 мкм. Изображения регистрировались каждые 30 минут с помощью микроскопа Celloger® Nano 4X в течение 15 часов и 30 минут.
Для количественной оценки апоптоза с течением времени построен график изменения площади регистрации флуоресценции. На графике видно, что флуоресценция начала обнаруживаться через два с половиной часа после обработки стауроспорином, а насыщение наступило через 10 часов после обработки, что позволило обнаружить флуоресценцию во всех клетках (рис. 3).
Рис.3 График расширения области флуоресценции со временем.
Трансфекция
Трансфекция генов проводится в различных исследовательских и терапевтических целях. Визуализация клеток в реальном времени считается золотым тандартом для количественной оценки эффективности трансфекции клеток или мониторинга действия трансфецированных генов в различных приложениях. Флуоресценция с экспрессией зеленого флуоресцентного белка в векторе pCMV-GFP, трансфицированном в клетку Hela, наблюдалась каждые 2 часа с помощью микроскопа Celloger® Nano. Полученные данные позволили подтвердить, что зеленый флуоресцентный белок начал экспрессироваться с 4 часов после трансфекции и сохранялся до 16 часов после трансфекции. (Рисунок 4).
Рис. 4 Фотографии экспрессии EGFP после трансфекции плазмиды pCMV GFP. Масштабная линейка, 200 мкм. Изображения собирались каждые 2 часа с помощью микроскопа Celloger Nano 4X в течение 40 часов.
